艾納香（Blumea balsamifera L），別名管芽，假東風草[1]、大風艾、大艾、冰片艾等，屬于菊科艾納香屬多年生木質草本植物，在我國主要產于廣西、貴州、云南、廣東等省[2]，以其全草或地上部分入藥，具有鎮痛、發汗、祛風除濕、去痰止咳、通經止血等功效，是一種重要的民間藥物。作為天然中草藥，艾納香含有多種有效成分，已經鑒定的有黃酮類、有機酸、萜類等[3-5]。同時，艾納香是天然龍腦的重要來源，艾納香精油中含30%左右龍腦[6]，是名貴藥材、香料、化妝品的原料及食品保健品的添加劑。 
　　艾納香屬多年生宿根植物，主要以宿根分株繁殖，分生苗移栽成活率低;艾納香利用種子育苗發現種子結實率低、休眠期長、發芽率低[7，8]。這些情況導致艾納香種苗短缺，嚴重制約了艾納香的規模化生產，因此必須研究艾納香的組織培養以快速獲得批量種苗，擴大種植規模以滿足日益增長的市場需求。此外，在進行組織培養時，直接以組織培養物替代原藥材是解決艾納香資源短缺的重要方法。對不同培養條件下的艾納香中龍腦含量進行比較，有利于擴寬艾納香藥材的應用，使這一古老的中藥為人類健康發揮更大的作用。 
　　1  材料與方法 
　　1.1  儀器 
　　7890A/5975C氣質聯用儀（Agilent公司）。 
　　1.2  試劑 
　　龍腦對照品，無水乙醇。 
　　1.3  供試材料 
　　艾納香組培愈傷組織;艾納香組培苗由貴州民族大學化學與環境科學學院組織培養實驗室培養了7個月的組培苗;艾納香野生苗采自貴州羅甸縣。 
　　1.4  龍腦對照品溶液的制備 
　　稱取龍腦對照品10 mg，置于10 mL的容量瓶中，加無水乙醇溶解并加至刻度，搖勻，即可得到濃度為1 mg/mL的溶液，作為標準品貯備液;另取200、300、400、500、600 μL的貯備液，分別置于10 mL容量瓶中加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液備用，濃度分別為0.02、0.03、0.04、0.05、0.06 mg/mL。 
　　1.5  氣質聯用條件 
　　1.5.1  色譜條件  采用HP-5MS氣相色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）;進樣口溫度為280 ℃，采用程序升溫，柱溫起始溫度為90 ℃，以5 ℃/min升溫至100 ℃，維持3 min;再以5 ℃/min升溫至150 ℃，維持2 min;分流比為40∶1;載氣為高純氦氣，載流速度為1.0 mL/min;進樣量為1.0 μL。1.5.2  質譜條件  電子轟擊粒子源，電離能量為70 eV;離子源溫度為230 ℃;傳輸線溫度為210 ℃;四級桿溫度為150 ℃。 
　　1.6  樣品的處理 
　　分別將艾納香愈傷組織、艾納香組培苗、野生苗3種樣品用研缽粉碎，稱取粉碎樣品8 g，放至250 mL的錐形瓶中，加無水乙醇100 mL，進行聲提取（聲時間為120 min，頻率為59 Hz，功率為80%），冷卻、搖勻、過濾，濾液置于100 mL容量瓶中，放冷，加無水乙醇至刻度，搖勻，從100 mL容量瓶中再取1 mL溶液，置10 mL容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，即為樣品溶液。 
　　1.7  龍腦對照品的氣質聯用分析 
　　分別從0.03 mg/mL的龍腦對照品溶液及樣品溶液中精密量取1 μL溶液，運用氣質聯用儀進行測定。 
　　1.7.1  標準曲線的繪制  分別精密吸取濃度為0.02、0.03、0.04、0.05、0.06 mg/mL的龍腦對照品溶液各1 μL，依次進樣，運用氣質聯用儀分別測定其峰面積，以龍腦對照品的峰面積為縱坐標，龍腦對照品濃度為橫坐標，繪制標準曲線。 
　　1.7.2  精密度測定  取濃度為0.03 mg/mL的龍腦對照品溶液1 μL，連續進樣6次，根據峰面積計算其相對標準偏差。 
　　1.7.3  重復性試驗  取艾納香野生苗，按照樣品溶液制備方法配制6份100 mL的溶液，根據氣質聯用法依次對6份供試品溶液進行測定，記錄樣品的峰面積，計算其相對標準偏差。 
　　1.7.4  加標回收率試驗  分別稱取艾納香組培苗和貴州羅甸野生苗各0.04 g，制備成樣品溶液，從中各取出6份，先測出藥材中龍腦的含量，再向每份中加入0.300 mg龍腦對照品，由氣質聯用儀測定6個樣品峰面積，計算平均回收率以及相對標準偏差。 
　　1.7.5  樣品含量的測定  分別量取愈傷組織供試品溶液、組培苗供試品溶液和野生苗供試品溶液各1 μL依次進樣，測定出峰面積，計算供試品溶液中龍腦的含量，每份平行測定3次。
　　2  結果與分析 
　　2.1  龍腦對照品溶液及樣品溶液氣質聯用分析 
　　從0.03 mg/mL的對照品溶液及樣品溶液中精密量取1 μL溶液進樣，從圖1至4可以看出，龍腦標準品的出峰時間在7.621 min;樣品色譜圖在7.621 min有一吸收峰與龍腦標準品保留時間一致;質譜圖檢索結果為龍腦成分。 
　　2.2  線性關系分析 
　　以龍腦的濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，見表1、圖5，計算回歸方程為：y=173.602 5 x，R2為0.997 01。結果表明，龍腦在0.02～0.06 mg/mL內線性關系良好（n=5）。 
　　2.3  精密度測定結果 
　　由精密度試驗方法，用氣質聯用儀進行分析，結果見表2，其相對標準偏差（RSD）為0.44%。表明方法的精密度良好。 
　　2.4  重復性試驗結果 
　　根據重復性試驗考察方法，由氣質聯用儀進行測定，結果見表3。 
　　由表3可得，6份供試品溶液中龍腦平均含量為3.621 6 mg/g，RSD為0.16%，表明方法的重復性好。 
　　2.5  加標回收率試驗結果 
　　測得組培苗中龍腦的平均回收率97.11%，RSD為1.14%;野生苗中龍腦的平均回收率97.78%，RSD為0.67%，表明該方法的度高（表4）。 
　　2.6  樣品含量的測定 
　　從表5可以得出艾納香組培苗中龍腦的平均含量為3.216 7 mg/g，貴州羅甸艾納香野生苗中龍腦的平均含量為3.620 0 mg/g。 
　　3  小結與討論 
　　在擬定的色譜條件下，以無水乙醇作為艾納香中龍腦的提取溶劑，采用聲提取，簡化了樣品的制備方法，而且艾納香中龍腦的含量測定沒有受到其他成分的干擾。氣質聯用儀用于檢測揮發性物質靈敏度高、度好。運用該方法，在對照品標準溶液中，色譜圖中龍腦出峰的時間在7.621 min，愈傷組織的色譜分析顯示，在該時間處沒有吸收峰，這說明愈傷組織中不存在龍腦。組培苗、羅甸野生苗質譜圖分析確定是龍腦，其中組培苗中龍腦的含量較野生苗低，但差異不大，原因可能是組培苗培養時間較短，龍腦在植物體內有一個逐步累積的過程。但組培苗可以人工快速培育繁殖，縮短培育周期，為艾納香藥材應用提供的苗木，以滿足日益增長的市場需求。